Ecdyson-Insektenhormon schaltet Krankheit ein
Ecdyson-Insektenhormon schaltet Krankheit ein
21. Juli 2013 | Induzierbares Expressionssystem – durch Elektromagnetismus
MORGELLONS:
DAS INSEKTENHORMON ECDYSONE (oder seine Analoga) LÖST GENETISCHE VERÄNDERUNGEN AUS,
UM NEUE HAARE, HAUT, NÄGEL ZU ERZEUGEN und KRANKHEITEN ZU VERURSACHEN
SkizitGesture-2013
Morgellons ist eine entomologische Terrorwaffe in Militärqualität, die verwendet wird, um unschuldige Zivilisten zu foltern und zu töten. Die medizinische Gemeinschaft wurde nicht über diese Krankheit informiert, und ihre Komplexität verhindert, dass sie richtig identifiziert, benannt, erforscht und behandelt wird. Je länger eine biologische Waffe unbehandelt bleibt, desto mehr Zeit hat sie, um ihre maximale Tödlichkeit zu erreichen. Die Behinderung ihrer Behandlung oder Heilung durch Behörden ist Teil der Militärstrategie. [1] Lehrbuch der Militärmedizin: Medizinischer Aspekt der chemischen und biologischen Kriegsführung, Einsatz biologischer Waffen, p. 636-658. http://www.cs.amedd.army.mil/borden/Portlet.aspx?ID=66cffe45-c1b8-4453-91e0-9275007fd157
Informationen über Morgellons können nicht früh genug gefunden werden. Viele Menschen sterben und die Todesfälle werden anderen Ursachen zugeschrieben – Lungenentzündung oder Herz- und Lungenproblemen. Daher ist Unterstützung aus allen Richtungen erforderlich. Dies ist meine Bitte, alle Fachleute mit Ausbildung und Ressourcen zu bitten, dieser Sache zu helfen. Außerdem gibt es Produkte, die sich die Menschen nicht leisten können und die ihnen gespendet werden könnten. Wenn es jemanden gibt, der über Mittel verfügt, die er bedürftigen Opfern zukommen lassen könnte, wenden Sie sich bitte an Skizit unter skizit@hushmail.com.
Nun zum Thema dieses Artikels: Menschen mit Morgellons haben oft langsam heilende Läsionen. Diese Läsionen können durch mikroskopisch kleine Arthropoden verursacht werden, die zu klein sind, um mit bloßem Auge gesehen zu werden. Hat ein Arzt gesagt, dass Sie wahnhaft sind, weil er/sie die Käfer nicht sehen kann? Wachsen Insekten oder Würmer, Bakterien, Pilze oder Pflanzen in Ihrer Haut?
Möglich macht dies die Gentherapie. Was ist Gentherapie? Gentherapie ist die Verwendung von DNA zur Behandlung oder Heilung von Krankheiten. Es kann verwendet werden, um Gene in tierischen und pflanzlichen Zellen zu verändern oder zu ersetzen. Um neue Gene in Zellen einzuschleusen, kommen verschiedene Methoden zum Einsatz.
Genetiker haben ein System zur Verwendung in transgenen Tieren entwickelt, bei dem das Ecdyson-Hormonrezeptormolekül des Insekts kontinuierlich in den Drüsenzellen des Organismus synthetisiert werden kann. [2] Campbell, John, Engineering the Human Germline: An Exploration of the Science and Ethics of Modating the Gene We Pass to Our Children, 7. Januar 2000.
Menschen haben 48(+?) Arten von Hormonrezeptoren, aber nicht den Ecdysonrezeptor, also muss sein Gen aus einem Insektengenom stammen. [3] Robinson-Rechavi M., Wie viele Kernhormonrezeptoren gibt es im menschlichen Genom? Trends Genet, 2001 Okt. 17(1)0:554-6. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11585645
Die Insektenhormonrezeptoren aus der Fliege DROSOPHILA MELANOGASTER oder anderen Arten werden in menschliche Zellen eingebaut. [4] D-Nr., Ecdyson-induzierbare Genexpression in Säugetierzellen und transgenen Mäusen, Proc Natl Acad Sci USA., 1996, 16. April; 93(8): 3346-3351. www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC39610/
Das frühe Patent trägt den Titel „Polynucleotide Encoding Insect Ecdysone Receptor“. US 6245531 B1, Polynukleotide sind DNA & RNA (Biopolymere aus 13 oder mehr Nukleotidmonomeren in einer Kette). [5] http://www.patentlens.net/patentlens/patents.html?patnums=US_6245531&language=&patnum=US_6245531&language=en&query=&stemming=&returnTo=quick.html%3Fquery%3D%2528US6723531%2Bin%2Bpublication_number%2529&pid=p0 #tab_1
Die Erfinder sind: David Hogness, Michael Koelle und William Seagraves. Auftraggeber ist das Board of Trustees der Leland Stanford University, Palo Alto, CA. Eingereicht am 30. September 1992, veröffentlicht am 7. Mai 1996. Das Patent sieht drei Plasmidkassetten vor, die genetische Anweisungen enthalten. Dieses Patent beschreibt die Insertion eines molekularen Schalters unter Verwendung des 20-OH-Ecdyson-Rezeptors (oder DHR3, E75A oder E75B), der genetisch in Insekten, Würmer, Bakterien, Pflanzen und Säugetiere eingefügt wird. Weitere Informationen zu den Patenten von Stanford im Zusammenhang mit Ecdysone finden Sie unter „RHeoGene and Invitrogen Sign Licensing Agreement for Ecdysone Receptor Technology“
Ecdyson wird in der biochemischen Forschung als Induktor bei transgenen Tieren verwendet, bei denen ein neues Gen in ein Tier eingeführt wird. Das Hinzufügen oder Entfernen von Ecdysteroiden aus der ERNÄHRUNG des Tieres schaltet das Gen ein oder aus. Dies schafft ein System, in dem Nahrung für Menschen mit dem Hormon der Wahl versetzt werden könnte, um Krankheit und Tod herbeizuführen. [6] Ecdyson-induzierbare Genexpression in Säugerzellen und transgenen Mäusen; Proz. Natl. Akad. Wissenschaft. VEREINIGTE STAATEN VON AMERIKA; Vol. 93, S. 3346-3351, April 1996, Genetics http://www.skizit.biz/2012/11/21/what-is-an-expression-system/
Transgen bezeichnet einen Organismus, dessen genetisches Material durch gentechnische Verfahren verändert wurde. Transgenese ist der Prozess der Einführung eines exogenen (aus einem anderen Organismus stammenden) Gens, das als Transgen bezeichnet wird, in einen lebenden Organismus, so dass der Organismus eine neue Eigenschaft aufweist und diese Eigenschaft an seine Nachkommen weitergibt.
Transgene Organismen können fremde Gene exprimieren, da der genetische Code für alle Organismen ähnlich ist. Das bedeutet, dass eine bestimmte DNA-Sequenz in allen Organismen für dasselbe Protein kodiert. Aufgrund dieser Ähnlichkeit in der Proteinsequenz können Wissenschaftler DNA an diesen gemeinsamen Proteinpunkten schneiden und andere Gene hinzufügen.
VEKTOREN
DNA, die ein therapeutisches (Behandlungs-)Protein codiert, wird in einen „Vektor“ verpackt. [7] Regulierbare Genexpressionssysteme für Gentherapieanwendungen: Fortschritte und zukünftige Herausforderungen, Curr Gene Ther. 6. August 2006 (4): 421-438; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15946903 .
Es kann mehrere Vektoren geben, vielleicht einen primären (Insekten-)Vektor und einen sekundären Vektor (Bakterien). Sobald sie sich in einer Zelle befindet, wird die DNA von der Zellmaschinerie exprimiert, was zur Produktion eines therapeutischen Proteins führt, das wiederum die Krankheit des Patienten behandelt.
Nukleinsäure (DNA), die ein therapeutisches Protein codiert, wird in einen viralen „Vektor“ eingebracht, dessen infektiöse Maschinerie verwendet wird, um die neue oder therapeutische DNA in die Zellen eines Organismus einzufügen. Die Nukleinsäuren (DNA) könnten dazu bestimmt sein, Ihnen zu helfen oder Ihnen zu schaden, wie z. B. ein Stealth-Virus, Bakterien oder andere pathogene Materialien im Fall einer Biowaffe wie Morgellons.
Als Virusvektor wird das Adenovirus verwendet. Adenovirale Vektoren können große DNA-Inserts enthalten (bis zu 35 kb). Sie sind menschliche Viren und können eine große Anzahl verschiedener menschlicher Zelltypen mit sehr hoher Effizienz transduzieren. Das Innere des Virus wird ausgehöhlt und die zu übertragenden Gene werden hineingesteckt. Das Virus infiziert die Zelle und die Ecdyson-Rezeptorproteine dringen in den Zellkern ein. Der Ecdyson-Schalter schaltet die DNA ein und sie wird im Tier exprimiert. [8] Graham, Lloyd D., Ecdyson-kontrollierte Expression von Transgenen.
http://informahealthcare.com/doi/abs/10.1517/14712598.2.5.525
Die Möglichkeit, den Vektor wiederholt zu verabreichen, ist in vielen Behandlungsprotokollen von entscheidender Bedeutung, daher ist es wichtig, das Vorhandensein mehrerer Generationen der Tiere im Opfer aufrechtzuerhalten. Um die Immunantwort zu unterdrücken, werden die für eine Immunantwort auf ein Antigen erforderlichen costimulatorischen Wechselwirkungen blockiert, wodurch das Immunsystem geblendet wird und eine wiederholte Verabreichung möglich wird.
[9] Anderson W. French, Human Gene Therapy, Nature, 1998 Apr 30,392 (6679 Suppl) 25-30.
Der Prozess der Genabgabe und -expression wird als Transduktion bezeichnet. Der Vektor muss in der Lage sein, auf den Zelltyp abzuzielen, der für die Krankheit am besten geeignet ist. Um eine stabile, anhaltende Genexpression zu erreichen, ist die Integration der Vektor-DNA in die Wirts-DNA oder in eine separate Struktur erforderlich, die als Episom bekannt ist, bei dem es sich um ein geschlossenes ringförmiges DNA-Molekül handelt, das im Zellkern repliziert wird. [10] Verma, Inder M., Weitzman, Matthew D.; Gentherapie: Medizin des 21. Jahrhunderts, Annu Rev. Biochem. 2005. 74: 711–38
KERNREZEPTOREN
Was ist ein Kernrezeptor? Ein Kernrezeptor ist ein Protein in Zellen, das Steroid- und Schilddrüsenhormone wahrnimmt und die Expression spezifischer Gene reguliert, nur wenn ein Ligand (Hormon) wie Ecdyson vorhanden ist, wodurch die Entwicklung, Homöostase und der Stoffwechsel des Organismus gesteuert werden. [11] Evans R. M. Die Superfamilie der Steroid- und Schilddrüsenhormonrezeptoren. Wissenschaft. 1988;240 (4854):889-95. http://links.jstor.org/sici?sici=0036-8075%2819880513%293%3A240%3A4854%3C889%3ATSATHR%3E2.0.CO%3B2K
[12] Mangelsdorf DJ, et al. Die Kernrezeptor-Superfamilie: das zweite Jahrzehnt. Zelle 1995; 83(6): 835-9; http://Blumberg.bio.uci.edu/reprints/mango-cell-intro.pdf
Der Ecdysonrezeptor (EcR) ist ein Steroidhormonrezeptor, der an der Auslösung der Metamorphose in der Fliege Drosophila melanogaster beteiligt ist. Eine Klasse von Steroidhormonen namens Ecdysteroide bindet an den Rezeptor EcR. [13] Regulierbare Genexpressionssysteme für Gentherapieanwendungen: Fortschritte und zukünftige Herausforderungen. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1629032/
Steroidhormonrezeptoren sind die größte Gruppe von Transkriptionsfaktoren im Proteom von Säugetieren (Liste aller Proteine in einer einzelnen Zelle oder einem Organismus). Die Liganden (Hormone) von Steroidrezeptoren überwinden mühelos epitheliale (Haut-)Barrieren und Plasmamembranen (umschließen Zellen). Die Hormone binden an ihre Rezeptoren im Zytoplasma (die Zellsubstanz zwischen Zellmembran und Zellkern) und diese Hormon-Rezeptor-Komplexe werden dann in den Zellkern transportiert, wo sie die Genexpression regulieren.
Die intrazellulären (innerhalb der Zelle) Proteinrezeptoren übernehmen normalerweise die gesamte Aufgabe, genetisches Material von einer Zelle zur anderen zu übertragen. Die Hormon-Rezeptor-Komplexe binden an spezifische Stellen in der DNA der Zelle und stimulieren die Transkription (den Prozess, bei dem mRNA aus einer DNA-Matrize synthetisiert wird, was zur Übertragung genetischer Informationen vom DNA-Molekül auf die mRNA führt) spezifischer Gene. Als Reaktion auf die Hormonstimulation produzierte mRNA wird im Zytoplasma in neues Protein übersetzt. Dieses neue Protein könnte ein Krankheitserreger sein, der als Teil einer Biowaffe eine Krankheit hervorruft. [14] www.course-notes.org/Biology/Outlines/Chapter_45_Hormones_and_the_Endocrine_System
Bei Insekten löst Ecdyson Reproduktion, Wachstum, Häutung und Entwicklung durch die Aktivierung des Ecdyson-Rezeptors aus. Der Rezeptor heißt EcR und ist mit einem anderen Protein namens Ultraspiracle (USP) gekoppelt. [15] Ecdyson-induzierbare Genexpression in Säugerzellen und transgenen Mäusen; Proz. Natl. Akad. Wissenschaft. USA, Bd. 93, Seiten 3346-3351, April 1996 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC39610/pdf/pnas01515-0196.pdf
Der Ecdysonrezeptor erkennt und reagiert auf das Vorhandensein von Ecdyson, wodurch eine Kette von molekularen Ereignissen ausgelöst wird, die die Entwicklung, Homöostase und den Stoffwechsel des Organismus steuern. Das Vorhandensein von Ecdyson löst den Ecdysonrezeptor aus. Ohne Ecdyson passiert nichts. Dieser molekulare Ein-/Ausschalter wird als induzierbares Expressionssystem bezeichnet. Ecdyson hat keine Wirkung auf Tiere, in die keine zusätzlichen Gene eingefügt wurden, so dass seine Anwesenheit darauf hinweist, dass das Transgen funktioniert. [16] Induzierbare Kontrolle der Transgenexpression mit Ecdysonrezeptor: Genschalter mit hoher Empfindlichkeit, robuster Expression und reduzierter Größe; RheoGene, Inc., Norristown, PA, USA; BioTechniques 39:191-200 (August 2005)
http://www.biotechniques.com/multimedia/archive/00004/BTN_A_05392ST01_O_4596a.pdf
WAS MACHT DAS INDUZIERBARE EXPRESSIONSSYSTEM?
Das Gen erhält einen Promotor, der nur in den Drüsenzellen des Zielorgans aktiv ist, damit eine Krankheit an einer bestimmten Stelle im Körper wie Gehirn, Herz, Bauchspeicheldrüse, Leber, Haut, Fingernägel oder Haarfollikel platziert werden kann , aber es ist möglich, dass die Produkte der Genexpression im gesamten Organismus zu sehen sind.
Im Ecdyson-induzierbaren Expressionssystem wird DNA unter Verwendung von E. coli und anderen mikrobiellen Wirten wie Bacillus subtilis, Salmonella, Serratia und verschiedenen Pseudomonas-Spezies kloniert.
Dieses System verwendet Enhancer oder Promotoren, die von Viren wie SV40, Adenovirus, Rinderpapillomavirus, Polyomavirus, Cytomegalovirus und Retroviren wie Leukämievirus, Rous-Sarkomvirus und HIV stammen.
Bei den eingeschalteten Genen kann es sich um Stealth-Viren oder andere pathogene genetische Konstruktionen, einschließlich von Menschenhand geschaffener, handeln. Der Ecdyson-Schalter könnte auch verwendet werden, um ruhende Viren einzuschalten.
Dieses System verwendet Reportermoleküle wie Luciferase (ein allgemeiner Begriff für Biolumineszenz), so dass das Vorhandensein oder der Ort eines gewünschten Liganden (Hormons) leicht bestimmt werden kann.
Das Ecdyson-System hat Auswirkungen auf einige Arten von Blutzellen wie Lymphozyten und Neutrophile und kann das Immunsystem regulieren. Auch während der Gentherapie kann das Vorhandensein von Zytokinen im Blut zu Müdigkeit und in extremen Fällen zum Tod führen. Zytokine sind Regulatoren des Immunsystems wie Interleukine und Interferone. Virale Vektoren induzieren eine Immunantwort, weil sie immunogene Epitope innerhalb des Organismus exprimieren. Die erste Immunantwort, die nach dem Vektortransfer auftritt, sind Zytokin- und Chemokin-Sekretionen an einer Läsionsstelle. [17] Bessis, N., Immunantworten auf Gentherapiesektoren: Einfluss auf die Vektorfunktion und Effektormechanismen; Gentherapie 2004 Vol (): S10-S17. http://www.nature.com/gt/journal/v11/n1s/full/3302364a.html
Sie können einen Ausschlag mit mehreren Läsionen haben. Nebenwirkungen von Zytokinen sind Entzündungen und/oder Ulzerationen oder ausgedehnte papulöse Eruptionen. [18] James, William, et al. (2005). Andrews-Krankheiten der Haut: Klinische Dermatologie. (10. Aufl.). Saunders.
Wenn Sie mit dem Ecdysone Inducible Expression System geimpft wurden, haben Sie möglicherweise Ecdyson oder andere Arthropodenhormone und -rezeptoren in Ihrem Blut. Es kann ein Bluttest für das Hormon und seinen Rezeptor geben. Es wäre sicherlich ungewöhnlich, danach zu fragen, es sei denn, Ihr Arzt hat verstanden, dass Morgellons-Opfer, die mit Arthropoden, Nematoden, Pflanzen und Parasiten infiziert waren, mit diesen Techniken manipuliert wurden.
Befall durch Arthropoden
Ein Befall von Fliegen (der Ordnung Diptera) wird als Myiasis bezeichnet. Es gibt 38 Arten parasitärer Fliegen. Myiasis ist ein Zustand, bei dem Fliegen der Ordnung Diptera Eier in die Haut oder das Fleisch eines Menschen oder eines anderen Wirbeltiers legen. Ein Wirbeltier ist ein Tier mit einem Rückgrat. Babyfliegen, Larven (Maden) genannt, werden im Fleisch des Wirts geboren und fressen lebendes oder totes Gewebe, Körperflüssigkeiten und aufgenommene Nahrung. Das Weibchen legt Eier in offene Wunden, in unversehrte Haut, in Nase oder Ohren oder in Nahrung oder Wasser. Der Lebenszyklus besteht aus Ei, Larve, Puppe und Erwachsenen. Wenn die Larven schlüpfen, schneiden sie durch die Haut und tunneln durch das Wirtsgewebe, was zu Läsionen und gefährlichen Infektionen führt. [19] http://www.morgellonsuk.org.uk/micromyiasis.htm
Ein Milbenbefall wird Acariasis (der Ordnung Acari) genannt. Befall durch Nematoden (Fadenwürmer) sind nach dem Tier benannt. Die durch Peitschenwürmer verursachte Krankheit wird Trichuriasis genannt. Andere Morgellons-Infektionen werden durch parasitische Wespen, Motten, Ameisen, Spinnen und viele andere Arthropoden verursacht.
In Morgellons legen diese Tiere Eier aggressiv in die Haut. Weibliche Milben müssen nur einmal befruchtet werden und bleiben lebenslang befruchtet. Einige weibliche Arthropoden werden schwanger geboren. Diese Super-Eischichten können dafür verantwortlich sein, dass Ecdyson ständig im menschlichen Körper vorhanden ist, so dass DNA-Veränderungen und die Rekonstruktion von Organen (Haut, Haare, Nägel) auftreten können.
MORGELLONS-ERFAHRUNG
Anziehung von Insekten: Das Vorhandensein von Insektenhormonen in der Haut könnte erklären, warum manche Opfer von Morgellon das Gefühl haben, dass Insekten von ihnen angezogen werden.
Gehirnnebel: Alle Steroidhormone passieren leicht die Blut-Hirn-Schranke, sodass einige Veränderungen in der Gehirnchemie durch fremde DNA für den Gehirnnebel verantwortlich sein können. Die induzierten oder „eingeschalteten“ genetischen Veränderungen können auf bestimmte Organe oder Systeme, einschließlich des Gehirns, abzielen. Die Möglichkeiten, die mit diesem Symptom verbunden sind, müssen weiter untersucht werden.
Präsenz fibrillärer Strukturen: Dieses System eignet sich perfekt für die Bereitstellung fibrillärer Strukturen, die bei verschiedenen Krankheiten wie der Alzheimer-Krankheit vorkommen. Es kann filamentierende Bakterien und Pilze liefern, die auf natürliche Weise oder als Reaktion auf ihre Umgebung und verfügbare Nahrungsquellen filamentieren. In Morgellons bilden verschiedene Bakterien, darunter E. coli und Bacillus subtilis, farbige Filamente, die anzeigen, wie viel der Moleküle, die zur Bildung der Fasern benötigt werden, vorhanden sind, daher sind sie Sensoren.
Lieferung von künstlichen Materialien: Es kann künstliche Moleküle und Hydrogele liefern, die Netzwerke und Goo in verschiedenen Farben bilden. Vollständig aus DNA bestehende Hydrogele werden mit verschiedenen biologischen Organismen konjugiert. Es gibt so viele Materialien und Strukturen, die die Opfer von Morgellons in ihren Körpern finden, dass es für jeden, der die Wissenschaft, die sie geschaffen hat, nicht studiert hat, keine Möglichkeit gibt, zu wissen, was sie sind. Viele haben bei näherer Betrachtung Logos, Namen, Adressen und Bilder ihrer Hersteller.
Ein Patent, das die Einkapselung von Polymermaterialien beschreibt, ist
Der Artikel bezieht sich speziell auf ein patentiertes insektizides Verabreichungssystem (US-Patent 4844896). Das Patent beschreibt eine:
„1. Mikroverkapseltes Pathogen, umfassend:
(i) ein insektizides Pathogen, einschließlich eines Virus, Bakteriums oder Pilzes, von dem bekannt ist, dass er Insekten infiziert(ii) ein polymeres Einkapselungsmittel, umfassend Polyacrylate, Polyacrylsäuren, Polyacrylamide oder Mischungen davon;(iii) ein Sonnenschutzmittel, umfassend Methylorange, Malachitgrün oder sein Hydrochlorid, Methylgrün, Brillantgrün, ein FDC-Grün, Coomasie-Brillantblau R, Methylenblau-HCl-Salz, Brillantkresylblau, Acridingelb und FDC-Gelb, ein FDC-Rot , fluoresceinfreie Säure oder Mischungen davon.“
Selbstorganisierte nichtvirale Vektoren: Komplexe bestehen aus DNA und kationischen (der Wirkstoff trägt eine positive Ladung) Lipiden oder kationischen Polymeren, die in Plasmide eingebaut oder auf Viren oder Bakterien huckepack getragen werden können. Die in biomedizinischen Anwendungen verwendeten Polymere finden Sie in diesem Artikel. Ich habe es ausgedruckt, konnte aber den Link nicht finden, also werde ich versuchen, es irgendwo zu veröffentlichen, wenn nicht bald hier. [20] Polymers for DNA Delivery, Molecules 2005, 10, 34-64.
Mehrere Parasiten: Die tierischen Vektoren sind Parasiten, die ihre eigenen Parasiten haben, die Endoparasiten genannt werden. Ein Wirt und ein Parasit werden kommensale Partner genannt. Kommensalismus ist eine Beziehung zwischen Individuen zweier Arten, bei der die kleinere kommensale Art Nährstoffe, Schutz, Unterstützung oder Transport vom Wirt erhält, ohne dass der Wirt davon profitiert oder geschädigt wird.
MENSCHLICHE HAUT
Die menschliche Haut ist ein UNABHÄNGIGES PERIPHERES ENDOKRINES ORGAN, das Hormone produziert und in der Lage ist, Hormone zu verstoffwechseln und sie zu aktivieren und zu inaktivieren. [21] Zouboulis; Christos C.; Menschliche Haut: Ein unabhängiges peripheres endokrines Organ; Hormonforschung 2000;54:230-242; http://www.klinikum-dessau.de/fileadmin/user_upload/Hautklinik/PDF-Files/110_hormres.pdf
Die menschliche Haut produziert Hormone, die in den Kreislauf abgegeben werden und für die Funktionen des gesamten Organismus wichtig sind. Daher ist es das Ziel der Ecdyson-Rezeptor-Gentherapie.
Die menschliche Haut produziert aus Fettsäuren insulinähnliche Wachstumsfaktoren und Bindungsproteine, Propiomelanocortin-Derivate, Katecholamine (Noradrenalin und Epinephrin), Steroidhormone, Vitamin D, Retinoide und Eicosanoide (Prostaglandine, Prostacycline, Leukotriene). Hormone üben ihre biologische Wirkung auf die Haut durch Interaktion mit Rezeptoren für Peptidhormone, Neurotransmitter, Steroidhormone und Schilddrüsenhormone aus.
Einige Morgellons-Opfer, die die Krankheit über einen langen Zeitraum hatten, vielleicht über 8-10 Jahre, berichten, dass ihre Haare, Haut und Nägel vollständig durch krankes Gewebe mit lebenden Tieren darin ersetzt wurden, mit synthetischen Materialien, seltsamen Farben und sogar leuchtend oder blinkend Haut. Diese Zustände werden durch Genabgabe an die Haut ermöglicht. [22] Trainer, Alison; Alexander, M. Yvonne, Gene Delivery to the Epidermis; Human Molecular Genetics 1997, Bd. 6, Nr. 10. Der Großteil der Epidermis besteht aus Keratinozyten. Durch die Verwendung von Keratin-Promotoren exprimieren Keratinozyten exogene Gene wie das Gerinnungskaskade-Protein Faktor IX und Wachstumshormon. Die Epidermis hat eine sekretorische Fähigkeit, die es ermöglicht, rekombinante Genprodukte, die in der Epidermis exprimiert werden, in den Kreislauf zu sekretieren,
GENTHERAPIE ALS BIOWAFFE
Gentherapie kann verwendet werden, um Krankheiten auszulösen oder zu heilen. Das Ziel der Gentherapie als Waffe ist es, eine dauerhafte schwächende Veränderung in der genetischen Ausstattung des Opfers zu bewirken. Die Waffe muss nicht tödlich sein, um wirksam zu sein, da Handlungsunfähigkeit und Verwirrung die einzige Unterbrechung sein können, die erforderlich ist, um die beabsichtigten Wirkungen zu erzielen. Dies sind die genauen Effekte, die wir in Morgellons sehen. Die Menschen sind mit überwältigenden multiplen Krankheitserregern handlungsunfähig. Sie verlieren ihre Gesundheit, ihren Arbeitsplatz, ihre Familien, ihr Eigentum und ihren Platz in der Gesellschaft, um zu verhindern, dass andere Menschen angesteckt werden.
Gentherapie wird verwendet, um das Erbgut einer Person ohne ihr Wissen oder ihre Zustimmung mittels eines Insektenvektors zu verändern. Insekten übertragen Gene über ihren Speichel, ihr Fortpflanzungssystem oder ihr Ausscheidungssystem. Sie liefern das Hormon, den Rezeptor und die Krankheiten.
Insekten tragen Bakterien, die verwendet werden können, um Ihre DNA in einem Prozess namens Baktofektion zu verändern. Ein Ergebnis der Impfung war die Idee, abgeschwächte Bakterien als Träger zu verwenden, um Plasmid-DNA zu den Kernen bestimmter Zellen zu transportieren. Die Baktofektion kann die Produktion von Antikörpern aus einer Vielzahl von Krankheitserregern stimulieren, indem Plasmid-DNA freigesetzt wird, die spezifisch codiert ist, um die Produktion eines bestimmten Antigens zu stimulieren, und könnte sogar als allgemeine Impfung gegen Krebs dienen. Attenuierte Bakterien wie Shigella, Salmonella und Listeria wurden alle als Wirkstoffe zur Übertragung von Baktofektionen verwendet. Nanopartikel werden auch verwendet, um DNA zu transportieren. [23] Bakterien geben Nanopartikeln einen Ritt. http://libna.mntl.illinois.edu/pdf/publications/76.nnano.2007.149.complete_akin.pdf
Die Gene müssen in die Zellen gelangen und stabil auf den richtigen Ebenen exprimiert werden. Die genetische Kontrolle muss äußerst präzise sein, damit eine potenziell tödliche Krankheit nicht vorzeitig, sondern erst als Reaktion auf den Auslöser ausgelöst wird. [24] Block, Steven M., Living Nightmares: Biological Threats Enabled by Molecular Biology, p. 64-68 http://www.stanford.edu/group/blocklab/Block%20New%20Terror%20Chapter%202.pdf
Gentechnisch veränderte Systeme neigen dazu, „undicht“ zu sein. Das hat sich mit den strengeren Kontrollsystemen wie dem Insektenhormon-Ecdyson-System geändert. Stealth-Viren können über lange Zeiträume verbleiben, ohne erkennbaren Schaden anzurichten. Sie können ansteckend sein, sich über einen längeren Zeitraum unbemerkt in einer Zielpopulation ausbreiten und dann ausgelöst werden.
Mit den genetischen Werkzeugen der Zell- und Molekularbiologie ist es möglich, zunächst über eine Krankheit nachzudenken und dann über molekulare Signalwege, die für die Gesundheit des Menschen entscheidend sind, den dafür notwendigen Erreger zu konstruieren. Die Krankheit könnte auf die Immunantwort abzielen und sich unserer natürlichen Fähigkeit entziehen, sie zu bekämpfen; oder es könnte normalerweise ruhende Gene aktivieren und Chaos in unseren Zellen anrichten; oder es könnte einfach die Zellen in unserem Körper anweisen, Selbstmord im programmierten Zelltod (Apoptose) zu begehen. Das sind die Prozesse, die mit dem ecdysone-System ausgelöst werden können.
Induzierbare Hormonrezeptorsysteme können in Arthropoden, Nematoden, Pflanzen verwendet werden. [25] Entwicklung eines streng regulierten und hochgradig induzierbaren Ecdysonrezeptor-Genschalters für Pflanzen durch die Verwendung von Retinoid-X-Rezeptor-[menschlichen] Chimären. Transgene Res. 2007 Oct;16(5):599-612. Epub 1. Dezember 2006. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17139530
[26] Erzeugung von Ecdyson-Rezeptor-Chimären in Pflanzen zur kontrollierten Regulation der Genexpression, Mol Gen Gent (1999) 261; 546-552. http://link.springer.com/article/10.1007/s004380050999#page-1
und Säugetiere [27] Ecdyson-Rezeptor-basiertes induzierbares Genexpressionssystem; US 7091038 B2. durch Verschmelzen des Kernhormon-Insektenrezeptors mit bestehenden Hormonrezeptoren.
KERNHORMON-REZEPTOR-PROTEINE UND WAS SIE TUN
Nukleare Hormonrezeptorproteine werden aktiviert, wenn sie an spezifische DNA-Sequenzen gebunden sind. Das gebundene Hormon verbiegt die Form des Rezeptors, sodass er sich an seinen Promotor binden und das Gen aktivieren kann. Sie dienen als An-Aus-Schalter zum Kopieren von DNA im Zellkern. Diese Schalter steuern die Entwicklung und Differenzierung von Haut-, Knochen- und Verhaltenszentren im Gehirn sowie die kontinuierliche Regulierung von Fortpflanzungsgeweben.
Im Fall von Testosteron schaltet das Vorhandensein von Testosteron das Gen ein; Entfernen Sie es und das Gen verstummt. Östrogen und andere Steroidhormone wirken auf die gleiche Weise, wobei jedes seinen eigenen spezifischen Rezeptor bindet, um seine eigenen hormonabhängigen Promotoren zu aktivieren. Sogar niedere Tiere kontrollieren die Genexpression mit Steroidhormon/Rezeptor-Systemen. Beispielsweise bilden Ecdyson und Ecdysonrezeptor ein für Insekten einzigartiges System. [28] Identifizierung von Liganden und Coliganden für den Ecdyson-regulierten Genschalter. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC18950/
Der Ecdyson-Schalter von Insekten ist wie eine gespannte Waffe, die ausgelöst werden könnte, um Krebszellen abzutöten. Die Waffe ist das Gen, das für das Diphtherie-Toxin kodiert, ein tödliches Zellgift. Das Gen wird durch Ecdyson über einen Ecdyson-abhängigen Promotor aktiviert. Dieser Promotor wird aus einem Insektengenom herausgeschnitten und vor das Toxingen geklebt.
Zum Schutz vor Prostatakrebs wird eine Zwei-Gen-Kassette verwendet. Gen 1 kodiert für den Ecdyson-Rezeptor, der die Expression von Gen 2 steuert, das für das Diphtherie-Toxin kodiert. Wenn Ecdyson vorhanden ist, wird das Toxin-Gen in Prostatazellen exprimiert und die Zellen sterben ab. Das Toxin-Gen wird in keiner anderen Zelle exprimiert, da keine anderen Zellen den Ecdyson-abhängigen Transkriptionsfaktor synthetisieren.
Wenn Prostatakrebs jemals diagnostiziert würde, würde ein Mann eine Ecdyson-Injektion bekommen. Das Hormon würde die Ecdyson-Rezeptoren in seinen Prostatadrüsenzellen aktivieren, was das Diphtherie-Gen „einschalten“ würde, was zu Diphtherie-Toxin führen würde, das die Zellen töten würde. Ecdyson wäre im ganzen Körper vorhanden, aber nur Prostatazellen hätten den Ecdysonrezeptor, an den es binden würde, da Ecdyson kein natürliches Hormon des Menschen ist.
Dieselbe gespannte Waffe könnte auf die Brust, die Bauchspeicheldrüse oder andere empfindliche Gewebe gerichtet werden. Dies sind Keimbahn-Engineering-Verfahren und -Strategien, die Genetiker verwenden, um transgene Tiere und Menschen zu erschaffen. http://books.google.com/books?id=9VZ6EF_TUw8C&pg=PA13&lpg=PA13&dq=ecdysone+receptor+in+humans&source=bl&ots=lV6SNqv0wV&sig=NmGaKS8RKMjIcAEhR2IyIYhbzk4&hl=en&sa=X&ei=8nSIUdnKN4uw8ASfrYCIAQ&ved=0CCwQ6AEwADgK#v=onepage& q=ecdysone%20receptor %20in%20Menschen&f=falsch
KONSEQUENZEN
Es ist nicht schwer zu sehen, wie dieses induzierbare System in ahnungslosen Menschen installiert und dann zu einem günstigen Zeitpunkt eingeschaltet werden könnte, um einen Teil der Bevölkerung auszulöschen. Die Hormone können in Lebensmittel gegeben werden und wer kontrolliert den Inhalt von Lebensmitteln? Wenn Nahrung knapp wäre und jeder von den Behörden für Nahrung und Wasser abhängig wäre, würde die Quelle einer Chemikalie, die das Einschalten des Schalters veranlasste, so dass jeder im Körper einer Person vorhandene Krankheitserreger eine Krankheit hervorrufen würde, die sie handlungsunfähig machen würde . Dieses System bietet eine strenge Kontrolle über eine Population hilfloser Bürger.
„Asche und Diamanten, Feind und Freund, am Ende werden wir alle gleich sein.“ – Roger Waters, Pink Floyd
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ANDERE INDUZIERBARE EXPRESSIONSSYSTEME
http://www.patentlens.net/daisy/promoters/271/272/g3/1465.html
Andere Patente im Zusammenhang mit auf Steroide ansprechenden Promotoren
Es gibt eine zunehmende Anzahl von Patentdokumenten im Zusammenhang mit der Superfamilie der Steroid-/Retinoid-/Schilddrüsenrezeptoren und ihre vielfältigen Anwendungen, die den Rahmen dieses Berichts sprengen würden. Die Offenbarung der europäischen Anmeldung EP 1112360 A1 diskutiert mehrere Patentanmeldungen und Patente, die sich auf dieses Thema beziehen. Als solches ist es eine gute Referenz für diejenigen, die die Patentlandschaft in diesem Bereich in einem viel breiteren Kontext bewerten möchten.
Die folgende Liste von Patentdokumenten bezieht sich auf chimäre induzierbare Rezeptoren, die unter anderem Domänen von Steroid-responsiven Promotoren wie Glucocorticoid, Mineralocorticoid und Östrogen kombinieren. Einige von ihnen kombinieren auch Rezeptoren, die sowohl auf Steroid- als auch auf Metallverbindungen reagieren können, was sie zu einem doppelt induzierbaren Promotorsystem macht. Schließlich sind auch aus verschiedenen Insekten isolierte Ecdyson-Rezeptoren und neue Rezeptoren auf Basis des Retinsäure-Rezeptors enthalten. Diese Dokumente stellen keinesfalls die Gesamtzahl der Patente dar, die sich auf dieses umfangreiche Thema beziehen, geben aber einen Eindruck von den vielfältigen Anwendungsmöglichkeiten auf diesem Technologiegebiet.
ELEKTROMAGNETISCHE INDUZIERBARE EXPRESSIONSSYSTEMESobald sich induzierbare Expressionssysteme im Körper befinden, kann es möglich sein, sie über elektromagnetische Frequenzen zum Arbeiten zu bringen, was ein Grund dafür wäre, eine Person in ihrem Haus zu bestrahlen.http://www.amazon.com/frequency-electromagnetic-field-induction-expression/dp/1243491094
Niederfrequente elektromagnetische Feldinduktion der Hitzeschock-Genexpression: Promotor für gezielte Gentherapie.– Paul H. Frisch
Fortschritte in der Kenntnis der Genfunktion in Verbindung mit fortschrittlichen Labortechniken zur Manipulation und Veränderung von genetischem Material haben sich zu einer neuen Richtung der potenziellen Krebsbehandlung entwickelt. Forschungen am Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (Li, et al., 2003) haben gezeigt, dass das Ku70-Genfragment unter der Kontrolle eines hitzeinduzierbaren (hsp70) Promotors in die Antisense-Orientierung gebracht und dadurch aktiviert werden kann Hitzeschock-Exposition bei Temperaturen im Bereich von 42°C–45°C. Das Ku-Heterodimer, bestehend aus zwei Untereinheiten, Ku70 und Ku80, ist ein Mitglied einer Familie von DNA-Reparaturproteinen, die beschädigte DNA reparieren, um die Integrität des Genoms zu bewahren. Die Hitzeschock-induzierte Expression von Antisense-Ku70-RNA schwächt die Ku70-Proteinexpression ab, wodurch der Reparaturprozess begrenzt wird, der Tumore gegenüber ionisierender Strahlung sensibilisiert. Die Anwendung der Temperaturen, die für eine thermisch induzierte hsp-Reaktion erforderlich sind, weist erhebliche Einschränkungen für das tatsächliche klinische Behandlungsszenario auf. Als Alternative könnten statische oder niederfrequente elektromagnetische Felder ein innovatives und nicht-invasives Verfahren zur konsistenten und einheitlichen Initiierung der zellulären Hitzeschockreaktion und der Stressprotein-hsp70-Expression bereitstellen. Diese Dissertation konzentrierte sich auf die Untersuchung der Nutzung elektromagnetischer Felder zur Initiierung einer zellulären Stressreaktion, die als Promotor fungiert und die Entwicklung einer zielgerichteten Gentherapie ermöglicht. Anfängliche Experimente bestätigten, dass niederfrequente elektromagnetische Felder eine hsp70-Hitzeschockexpression induzieren können, jedoch war die Größenordnung der Reaktion signifikant kleiner als von Yanagida dargestellt (Yanagida, et al., 2000). Fragen der Robustheit als Antwort aufwerfen. Die Experimente untersuchten die Möglichkeiten einer systematischen Beeinflussung der hsp70-Expression durch die potenzielle Einführung thermischer Effekte und/oder potenzieller Änderungen der chemischen Toxizität. Diese Experimente deuteten darauf hin, dass die potenziellen Verzerrungsparameter der chemischen Toxizität und Hitze die beobachtete hsp70-Expression in unseren Validierungsexperimenten nicht direkt beeinflussten. Bedenken darüber, ob elektrische Felder in einer klinischen Umgebung angewendet werden könnten, veranlassten die Forschung jedoch, die Magnetfeldkomponenten genauer zu untersuchen. Die signifikanten klinischen Vorteile der Verwendung von Magnetfeldern führten zu einer Reihe von Experimenten, die entwickelt wurden, um die hsp70-Reaktion zu untersuchen, die sich aus einer reinen statischen Magnetfeld-Exposition ergibt. Diese Experimente isolierten die magnetfeldinduzierte hsp70-Antwort, ohne elektrische Feldkomponenten, thermische Induktion oder Änderungen der chemischen Toxizität. Experimentelle Daten zeigten eine ungefähr 3-fache Erhöhung der hsp70-Antwort im Vergleich zu der Kontrolle ohne Exposition. Dies repräsentierte Reaktionsniveaus in der Größenordnung von etwa 25–30 % der hsp70-Reaktion auf thermisch induzierten Hitzeschock bei Expositionszeiten von 48 Stunden. Ein Vergleich der hsp70-Antwort mit der gemessenen von elektrochemischen Zell-Expositionen weist auf ein ähnliches Ansprechniveau hin, was weiter darauf hinweist, dass die statische Magnetfeld-Exposition ein bevorzugter klinischer Ansatz sein könnte. Eine Folgeserie von Experimenten konzentrierte sich auf die Adressierung und Analyse der gesamten genomischen Expression als Funktion der Magnetfeld-Exposition. Unter Verwendung der Affymetrix GeneChip-Technologie wurden zwei Wiederholungen der Magnetfeld-Exposition, zeigten Veränderungen in der Expression (hochreguliert) der Hitzeschockgene und identifizierten weitere alternative Gene, wie z. Diese Gene könnten potenziell als Promotorenkandidaten für Gentherapieanwendungen fungieren.__________________________________________________________________________
Wirtschaftsredakteure und Schriftsteller für Gesundheit/MedizinBIOWIRE2KSPRING HOUSE, Pa.–(BW HealthWire)–7. Mai 2002
Die Vereinbarung gewährt Invitrogen nicht-exklusive, weltweite Rechte
zur Herstellung und zum Verkauf von Ecdysone-Inducible Expression-Forschungskits
RHeoGene gab heute bekannt, dass es eine Vereinbarung ausgehandelt hat, Invitrogen (Carlsbad, CA) eine nicht-exklusive, weltweite Unterlizenz für den Verkauf von Invitrogens Ecdyson-induzierbarem Expressionssystem und verwandten Produkten ausschließlich zu Forschungszwecken zu gewähren. RHeoGene hält eine exklusive Lizenz für die Patente US 5.514.578, 6.245.531 und EP 0517805 der Stanford University , die den Verkauf und die Verwendung bestimmter Produkte auf Ecdyson-Basis abdecken.
Invitrogen produziert und vertreibt sein Ecdyson-induzierbares Expressionssystem seit 1996 unter einer separaten Lizenz. Unter seiner Lizenz von RHeoGene wird Invitrogen weiterhin Produkte des Ecdyson-induzierbaren Expressionssystems für Forschungszwecke an akademische, staatliche , industrielle und klinische Einrichtungen liefern. Kunden, die Ecdysonrezeptor -basierte Genexpressionssysteme für kommerzielle Zwecke verwenden möchten, sollten sich für eine kommerzielle Lizenz an RHeoGene wenden.
„Diese Lizenzvereinbarung ist die erste externe Bestätigung der Bedeutung der exklusiven Lizenz von RHeoGene für das geistige Eigentum, das von diesen Stanford-Patenten umfasst wird, nachdem umfassendere Ansprüche auf US 5.514.578 gewährt wurden“, sagte Tom Tillett, Executive Vice President for Operations von RHeoGene .
Die Stanford-Patente richten sich auf Gene, die Ecdyson-Rezeptoren auf Insektenbasis aus einem breiten Spektrum von Insektenarten codieren , und Verfahren zur Regulierung der Genexpression in Wirtszellen. Die Patentabdeckung umfasst Ecdysonrezeptor (EcR)-Gene, die aus Drosophila stammen , der Grundlage des Ecdyson-induzierbaren Expressionssystems von Invitrogen . Die Patente basieren auf der bahnbrechenden Forschung von Dr. David Hogness, emeritierter Munzer-Professor für Entwicklungsbiologie und Biochemie an der Stanford University. Die exklusive Lizenz von RHeoGene für diese Patente umfasst alle Anwendungen außerhalb von Pflanzen, einschließlich zellbasierter Assays, Genomik, Proteomik und Gentherapie, Zellkultur/Fermentation, transgene Tiere und Biosensoren.
Finanzielle Bedingungen wurden nicht bekannt gegeben.
RHeoGene ist die Quelle für fortschrittliche Anwendungen, Produkte und Technologien, die die Genexpression verwalten. Durch die nahtlose Integration von Biologie- und Chemieanwendungen, die ein präzises Management der Genregulation ermöglichen, konzentriert sich RHeoGene auf die Bereitstellung kundenspezifischer induzierbarer Genexpressionstechnologiesysteme, um die Proteomik, die Wirkstoffforschung, die Produktion von Biotherapeutika und die menschliche Gentherapie voranzutreiben . Die Betriebe von RHeoGene befinden sich in Spring House, Pennsylvania, und Charlottesville, Virginia. Weitere Informationen finden Sie unter www.rheogene.com.
QUELLE: RHeoGeneCOPYRIGHT 2002 Business Wire
Kein Teil dieses Artikels darf ohne die ausdrückliche schriftliche Genehmigung des Urheberrechtsinhabers reproduziert werden.Copyright 2002, Gale Group. Alle Rechte vorbehalten. Gale Group ist ein Unternehmen der Thomson Corporation.
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http://www.bio.davidson.edu/courses/Molbio/MolStudents/spring99/morgan/EcdReport.html
Ecdyson-induzierbare Säugetier-Expression
Das Ecdyson-induzierbare Säugetier-Expressionssystem ist eine neue Technik, die von Invitrogen angeboten wird, um die Genexpression zu kontrollieren. Die Technik bietet eine schnelle und effiziente Klonierung von PCR-Produkten, und nach der Klonierung kann das Genprodukt leicht exprimiert, nachgewiesen und gereinigt werden. Dieses Expressionssystem basiert auf einem Mechanismus, der von häutenden Insekten genutzt wird. Wissenschaftler erkannten, dass die Häutung durch das Steroid Ecdyson ausgelöst wurde. Ecdyson ist ein Induktorsteroid, das an einen Rezeptor bindet, der die Expression eines Zielgens stimuliert (1). Die Anpassung dieses Mechanismus an klonierte Gene ermöglichte die Kontrolle und Amplifikation der Genexpression durch Induktion.
Abbildung 1 wurde von http://www.Invitrogen.com/manuals.html bereitgestellt.
Der Ecdyson-Kontrollmechanismus nutzt einen Transkriptionsaktivator, der durch ein Ecdyson-ähnliches Steroid ausgelöst wird. Der Mechanismus besteht aus einem induzierbaren Rezeptor in einem Vektorplasmid und zwei Untereinheiten und dem klonierten Gen in einem anderen Plasmidvektor. Wenn diese beiden Vektoren in eine Zelle cotransfiziert werden, ermöglicht die Einführung eines Induktors den Beginn der Transkription. Der Induktor bindet tatsächlich an den Rezeptor, wodurch die beiden Untereinheiten interagieren. Diese Kombination verleiht dem Gen die richtige Konformation und die Transkription des geklonten Gens beginnt. Das Ecdyson-System ist streng reguliert, um das klonierte Gen zu exprimieren, da der Rezeptor für eines von zwei regulatorischen Steroiden von Säugetieren spezifisch ist; B. Ponasteron A oder Muristeron A. Dies verhindert eine unspezifische Induktion. Um die Effizienz zu steigern, fünf Kopien des Rezeptors befinden sich stromaufwärts in dem Vektor, der das klonierte Gen enthält. Diese Kontrollmechanismen sorgen für eine nicht nachweisbare Grundlinien-Expressionsrate, die bei Induktion um das 200-fache erhöht werden kann (siehe Abbildung 1). Die Bahnen in Fig. 1 stellen mit einem klonierten Gen transfizierte Zellen dar, die entweder nicht induziert (Bahnen 1 und 2), mit Muristeron A (Bahn 3) oder mit Ponasteron A (Bahn 4) induziert waren. Dann wurden die Bahnen mit einem Antikörper sondiert, um die relativen Proteinmengen zu bestimmen, die durch jede Bedingung produziert wurden. Die induzierten Zellen wurden eindeutig durch den Induktor beeinflusst und produzierten daher das Protein aus dem interessierenden klonierten Gen (2). Die Bahnen in Fig. 1 stellen mit einem klonierten Gen transfizierte Zellen dar, die entweder nicht induziert (Bahnen 1 und 2), mit Muristeron A (Bahn 3) oder mit Ponasteron A (Bahn 4) induziert waren. Dann wurden die Bahnen mit einem Antikörper sondiert, um die relativen Proteinmengen zu bestimmen, die durch jede Bedingung produziert wurden. Die induzierten Zellen wurden eindeutig durch den Induktor beeinflusst und produzierten daher das Protein aus dem interessierenden klonierten Gen (2). Die Bahnen in Fig. 1 stellen mit einem klonierten Gen transfizierte Zellen dar, die entweder nicht induziert (Bahnen 1 und 2), mit Muristeron A (Bahn 3) oder mit Ponasteron A (Bahn 4) induziert waren. Dann wurden die Bahnen mit einem Antikörper sondiert, um die relativen Proteinmengen zu bestimmen, die durch jede Bedingung produziert wurden. Die induzierten Zellen wurden eindeutig durch den Induktor beeinflusst und produzierten daher das Protein aus dem interessierenden klonierten Gen (2).
Diese Technik hat einen strengen Kontrollmechanismus geschaffen, um das Gen zu exprimieren, aber zuerst muss das Gen geklont werden. Invitrogen verwendet ein System namens Topo-Klonierung, um ein Gen effizient zu klonen. Die Topo-Klonierung bietet eine neue Möglichkeit, taq-amplifizierte PCR-Fragmente schnell zu klonieren. Diese Technik verwendet eher Topoisomerase 1 als Ligase, um PCR-Produkte an einen Vektor zu ligieren. Diese Methode ist effizienter als andere PCR-Klonierungsverfahren, da Ligasen, spezielle Primer und Modifikationen und Aufreinigung der PCR-Fragmente fehlen. Das Klonen dauert etwa fünf Minuten und bietet eine hohe Effizienz. Die meisten PCR-Fragmente können mit einer Effizienz von 95 % Rekombinanten des Genfragments in den Plasmidvektor kloniert werden (3).
Schließlich bietet Invitrogen eine breite Palette von Vektoreigenschaften, die zusammen mit diesen neuen Techniken verwendet werden können, um die Verwendbarkeit der Vektoren für viele Experimente zu erhöhen. Zu den Hauptvorteilen, die sie ihren Vektoren hinzugefügt haben, gehören: mehrere Klonierungsstellen, eine Auswahl an Resistenzgenen und ein Epitop und Tag. Die meisten Vektoren enthalten 15 oder mehr Restriktionsstellen in einem Reportergen, was das Klonen viel einfacher macht. Die verschiedenen Resistenzgene ermöglichen es einem Forscher, schnell stabile Zelllinien auszuwählen, die ein kloniertes Fragment enthalten. Das Epithel und die Markierung helfen, den Nachweis und die Reinigung Ihres Gens zu erleichtern. Diese Techniken und Produkte bieten ein hohes Maß an Kontrolle, Flexibilität und Effizienz, um das Klonen und die Genexpression schneller und einfacher als je zuvor zu machen (3).
Zitierte Werke
1 Campbell, N. Biology . Kalifornien: Benjamin/Cummings, 1996.
2 „Präzise Kontrolle der induzierbaren Expression in Säugetierzellen.“ Ecdyson-induzierbares System.
<http://www.Invitrogen.com/manuals.html> Aufgerufen am 7. Februar 1999.
3 „The Fastest Way to Clone PCR products.“ Topo-Klonen .
<http://www.invitrogen.com/manuals.html> Abgerufen am 7. Februar 1999.
